《表1 试验所用引物：玉米大斑病菌亲环素基因的克隆及表达规律分析》

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《玉米大斑病菌亲环素基因的克隆及表达规律分析》

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根据丝状真菌亲环素保守结构域的基因序列，设计简并引物（表1），以玉米大斑病菌cDNA为模板进行PCR扩增。总反应体系为25μL，包括:10×PCR Buffer 2.5μL、TaKaRa Taq DNA聚合酶5 U/μL0.3μL、cDNA 20 ng/μL 1μL、上下游引物10μmol/L各1μL、dNTP Mixture（2.5 mmol/L）2μL、dd H2O17.2μL。PCR反应条件为，95℃预变性5 min；94℃变性30 s，45℃～55℃退火30 s，72℃延伸90 s，共进行32个循环；72℃延伸10 min。取PCR扩增产物10μL，1%TAE琼脂糖凝胶、1.5～2 V/cm电泳检测，胶回收产物测序。