《表1 大刺鳅mstn分子克隆和实时荧光定量PCR引物序列》

  提示：宽带有限、当前游客访问压缩模式

本系列图表出处文件名：随高清版一同展现

《大刺鳅mstn基因克隆及表达分析》

1. 获取 高清版本忘记账户？点击这里登录

1. 下载图表忘记账户？点击这里登录

以实时qPCR法测定mstn基因在大刺鳅成鱼各组织、胚胎和胚后发育各时期的表达量。以β-actin（表1）为内参，依据已克隆的大刺鳅mstn基因c DNA全长设计的MSTN-Real-F和MSTN-Real-R为大刺鳅的特异性引物，反转录按Hi Script II Q RT SuperMix for qPCR（+gDNA wiper）试剂盒要求进行。Real-time qPCR按ChamQ SYBR qPCR Master Mix试剂盒要求操作；反应体系20μL:SYBR 10μL，c DNA模板2μL，上下游引物各0.4μL，DEPC水7.2μL；每个样品重复3次。扩增反应在Roche Light Cycler480仪上进行，反应程序：95℃30 s；95℃15 s，60℃30 s，40个循环。PCR反应后温度从60℃上升到95℃，绘制熔解曲线，以判断扩增产物的正确性。用2–ΔΔct法计算不同组织的相对表达量，用SPSS17.0软件分析差异显著性，结果用平均值±标准误（mean±SE）表示，用Excel2010作图。