《表1 基因克隆和荧光定量PCR所用引物序列》

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《魁蚶HIF-1α基因结构特征及对低氧胁迫的响应》

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根据实验室已得转录组数据库中的序列，利用Primer 5分别设计基因的两个特异性引物（HIF-1α-F、HIF-1α-R）扩增SbHIF-1αcDNA的中间片段。根据扩增出的中间片段再分别设计出两对5?和3?RACE引物（RHIF-1α-R1、RHIF-1α-R2）和（RHIF-1α-F1、RHIF-1α-F2）使用RACE试剂盒（Clontech）分别进行巢式扩增获得基因cDNA全长。第一轮使用试剂盒中的UPM分别和（RHIF-1α-R1、RHIF-1α-F1）进行四个体系扩增，再以第一轮扩增产物稀释50倍为模板，以NUP和（RHIF-1α-R2、RHIF-1α-F2）进行第二轮扩增。第一轮PCR反应程序为94℃30 s，72℃1 min，5个循环；94℃30 s，70℃30 s，72℃1min，5个循环；94℃30 s，68℃30 s，72℃1 min，20个循环；4℃保存。第二轮PCR反应程序为94℃30 s，68℃30 s，72℃2 min，20个循环；72℃2 min；4℃保存。所用引物见表1。