《表1 基因克隆和定量PCR所用引物》

《表1 基因克隆和定量PCR所用引物》   提示:宽带有限、当前游客访问压缩模式
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《苹果MdCYP707A家族基因表达分析和MdCYP707A1的功能鉴定》


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RNA的提取参照RNA plant plus Reagent试剂盒(天根),用反转录试剂盒PrimeScriptTM RT reagent Kit with gDNA Eraser(Perfect Real Time,TaKaRa)进行反转录,所得的cDNA用于后续的荧光定量PCR的模板。以18S RNA为内参基因,其正向引物为5′-ACACGGGGAGGTAGTGACAA-3′,反向引物为5′-CCTCCAATGGATCCTCGTTA-3′,qRT-PCR所用的荧光染料为UltraSYBR Mixture (with ROX),反应体系中各反应物的量如下:2×UltraSYBR Mixture 10.0μL,上游引物(10mmol·L-1)1.0μL,下游引物(10μmol·L-1) 1.0μL,cDNA 1.0μL,ddH2O 7.0μL,共20μL。每个模板3次生物学重复。荧光定量PCR反应条件:95℃预变性10 min,95℃变性15 s,56℃退火15 s,65℃延伸10 s,40次循环。最后采用2–??CT法进行定量数据分析。PCR所用引物在表1中列出。