《表1 基因克隆及其荧光定量PCR分析所用引物》

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《甘蓝自交不亲和性相关基因BoGSTL21的克隆与表达分析》

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根据转录组测序获得的c DNA序列，结合芸薹属数据库、同源重组酶原理以及原核表达载体p GEX-4T-1的序列特征，用Primer Premier 6.0软件设计引物GST-F/R （表1），分别以结球甘蓝‘A4’花蕾g DNA和c DNA为模板，在50μL PCR反应体系中依次加入20μL dd H2O、25μL 2×PCR Mixster Mix混合酶、上/下游引物各2μL和c DNA模板1μL；反应程序为94℃3 min；94℃30 s，60℃30 s，72℃55 s，40个循环；72℃5 min。PCR产物经1×104 mg L-1琼脂糖凝胶电泳，回收目的片段，利用clon Express快速克隆技术将目的片段连接到p GEX-4T-1载体上，后转入大肠杆菌感受态细胞DH5α，经菌液PCR将筛选出的阳性克隆送上海生物工程股份有限公司测序。