《表1 基因克隆及荧光定量PCR所用引物》

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《百子莲类枯草杆菌蛋白酶基因ApSBT的克隆及表达特性分析》

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s表示正向引物；a表示反向引物；ORF表示开放阅读框（open reading frame）

应用ABI7500荧光定量PCR仪[赛默飞世尔科技（中国）有限公司]通过q RT-PCR检测4种单一胁迫处理12和24 h后百子莲丛生芽Ap SBT基因的表达量，内参基因Actin及其他引物见表1。以百子莲EC的c DNA为模板，采用Ta Ka Ra的SYBR premix Ex TaqTM II kit进行q RT-PCR扩增，反应体系为20μL:2×SYBR 10μL，c DNA模版2μL，上、下引物各0.2μL，dd H2O 7.6μL。反应程序为:95°C预变性30 s，95°C变性10 s，52°C退火30 s，72°C延伸15 s，40次循环。每个体系重复3次，在同一批次完成内参和目的基因反应，以不加模板的体系为阴性对照。基因表达量应用2-ΔΔCT计算，△△CT=△[（Ct1–Ct0）处理–（Ct1–Ct0）对照]，其中1代表目的基因，0代表内参基因。Microsoft Excel 2010对表达量进行分析和绘图。