《表1 基因克隆及实时荧光定量PCR检测引物》
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《白木香JAZ1基因全长cDNA克隆及其在愈伤组织中的伤害诱导表达分析》
基于白木香转录组数据库得到AsJAZ1基因的UniGene片段,通过NCBI Blast比对发现该序列并不是全长,运用引物设计软件Primer 5.0分别设计AsJAZ1的两对引物,5’-和3’-末端的扩增的特异性引物JAZ-5’GSP1、JAZ-5′GSP2、JAZ-3’GSP1、JAZ-3’GSP2(表1),进行巢式PCR扩增。以健康的不经MeJA处理不同时间段的白木香愈伤组织混样提取的总RNA反转录得到的RACE cDNA为模板,反应体系和PCR程序按照SMARTerTM RACE cDNA Amplification Kit(Clontech公司)试剂盒说明书进行操作。1%琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物,切胶,用天根公司DNA琼脂糖凝胶回收试剂盒回收目的片段。将回收的PCR目的产物与pGM-T载体连接,转化TPO10菌株,在含有氨苄青霉素的LB平板上进行培养,挑取单克隆摇菌,经菌液PCR扩增和电泳检测后选择阳性克隆送生工生物工程(上海)股份有限公司测序。
图表编号 | XD0082030900 严禁用于非法目的 |
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绘制时间 | 2019.07.12 |
作者 | 廖永翠、章文春、魏建和、黄磊 |
绘制单位 | 江西中医药大学中医学院生命科学学院、江西中医药大学中医学院生命科学学院、中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所、中共凉山州喜德县党委组织部 |
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