《表2 基因名称及实时荧光定量PCR引物》

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《沙棘果实不同器官脂肪酸差异的多基因协同调控》

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依据本实验室前期构建的沙棘种子和果肉转录组数据库，基于获得的目的基因片段，利用Primer Quest在线软件设计特异引物（表2）。参考大连宝生物公司SYBR Premix Ex Taq TMⅡ（TliRNaseH Plus）试剂盒方法，根据美国Applied Biosystems公司的ABI-7500 Real time PCR仪推荐程序，开展q RT-PCR实验。采用2-ΔCt方法分析目的基因相对表达量，实验进行3次重复。经优化后的反应体系为20μL，2×SGExcel Fast SYBR Mixture 10μL；PCR正向引物（10μmol/L）1μL；PCR反向引物（10μmol/L）1μL；cDNA 2μL；RNase Free ddH2O 6μL；采用三步法PCR扩增标准反应程序，第一步:预变性95℃、30 s；第二步:40个循环:95℃、5 s，60℃、34 s；第三步:95℃、15 s，60℃、1 min，95℃、15 s。