《表1 实时荧光定量PCR基因扩增引物》

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(2)定量Q-PCR分析:基因的丰度测定方法参照Huang等SYBR荧光染料定量PCR方法[26]。扩增引物参考表1。Q-PCR反应体系为(25μL)为12.5μL SYBR Premix Ex TaqTM II,0.5μM前向和后向引物和1μL DNA模板(TaKaRa Biotechnology,Japan),Q-PCR扩增程序参考Huang(2011)[26]。定量PCR反应的特异性采用熔解曲线、凝胶图谱进行验证。实验中所有样品均设置三个平行,不含模板DNA的空白对照组也在相同条件下同时进行,以排除任何可能的环境干扰因素。标准曲线采用梯度稀释的已知浓度标准质粒为模板扩增获得。16S r RNA基因,nirS和nosZ的Q-PCR扩增效率分别为0.932、0.854和1.011。