《表1 实时荧光定量PCR基因引物序列》

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《广叶绣球菌β-D-葡聚糖对巨噬细胞RAW264.7免疫调节作用受体TLR4和TLR2的影响》

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将巨噬细胞RAW264.7以1×106个/m L的浓度接种到6孔培养板中，每孔2m L。贴壁后换液，将含有广叶绣球菌β-D-葡聚糖（15.625、31.25、62.5μg/mL）、1μg/mL LPS的细胞培养液和空白对照组分别加入培养板中，每组设4个复孔，作用24h后将处理过的巨噬细胞RAW264.7用预冷PBS清洗2–3次，用细胞刮刀将细胞刮下并收集到EP管中，加入RNAiso Plus提取总RNA，按照试剂盒反转录合成cDNA。然后进行实时荧光定量PCR反应，20μL反应体系扩增。反应条件：95℃90s；95℃5s，60℃30s，72℃30s(40个循环）；95℃15s，60℃1min，95℃15s。运用2-△△Ct相对定量法计算各组mRNA表达。PCR引物序列由深圳华大基因合成，详见表1。