《表1 翘嘴鳜炎症反应相关基因与内参基因的实时荧光定量PCR引物序列》

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《急性氨氮胁迫对翘嘴鳜幼鱼抗氧化酶活性及炎症反应相关基因表达的影响》

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采用宋美泽等（2018）的方法提取肝脏总RNA，即采用北京康为世纪生物科技有限公司提供的RNApure Tissue Kit试剂盒进行提取，然后使用HIFIscript cDNA Synthesis Kit试剂盒反转录合成cDNA。基于NCBI数据库获得的IL-1β、IL-8、HSP90α和TNF-α基因开放阅读框序列，以β-actin为管家基因，在NCBI数据库的Primer-BLAST程序中完成引物设计，委托生工生物工程（上海）股份有限公司合成，引物序列见表1。实时荧光定量PCR反应体系20.0μL:2×UltraSYBR Mixture 10.0μL，上、下游各0.4μL，cDNA模板0.8μL，ddH2O 8.4μL。扩增程序:95℃预变性10 min；95℃10 s，60℃30 s，72℃32 s，进行39个循环；60℃30 s，95℃15 s。采用2-△△Ct法计算目的基因相对表达量。