《表1 大弹涂鱼肝糖原代谢基因和内参基因实时定量PCR引物序列》

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《大弹涂鱼肝型GP基因的克隆及其在氨氮胁迫下的响应》

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GP：糖原磷酸化酶；GS：糖原合成酶；下同

基于大弹涂鱼GP、GS序列，以β-actin为内参基因，采用Primer Premier 6.0软件设计引物，引物序列见表1（邢晓丹，2018）。所用引物均由生工生物工程（上海）股份有限公司合成。采用Trans Script All-in one First-Strand cDNA Synthesis Super Mix for qPCR（One-Step gDNA Removal）试剂盒进行反转得到用于实时荧光定量的模板（北京全式金生物技术有限公司）。实时荧光定量PCR反应体系（20μL）:TransStart Tip Green qPCR SuperMix（0.1 U/μL）10μL、正、反向引物（10μmol/L）各0.4μL、cD-NA模板0.4μL、无菌水8.8μL。热循环系统反应条件包括95℃，3 min；40个循环：95℃10 s，57℃30 s，72℃30 s。采用相对定量2-ΔΔCt法计算目的基因的相对表达量（拜占春等，2019）。