《表1 基因扩增及实时荧光定量PCR引物》

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《紫苜蓿盐诱导NAC转录因子的鉴定、克隆及表达分析》

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植物中转录因子对盐胁迫的响应通常包含两类:一类为早期响应（一般在胁迫0.5～3 h内响应表达），另一类为中晚期响应（通常在胁迫处理6～24 h时诱导或抑制表达），因此，早期盐胁迫处理我们选取1 h时间点取材，中晚期盐胁迫处理选择24 h时间点取材（选取该时间点亦是为了避免光周期对基因表达的影响）。转录组测序由北京诺和生物技术公司完成。转录因子筛选参考Zheng等（2016）和董蔚等（2018）。简要描述为:对照（0 h）及盐胁迫处理1、24 h样品的测序片段经拼接、组装后，利用hmmscan软件对测序片段进行预测分析，然后利用加权截尾均值（trimmed mean of M-values，TMM）法对测序数据进行标准化处理，筛选差异表达基因[筛选标准为q≤0.005且|log2（变化倍数）|≥1]。获得差异表达基因后，将它们与蒺藜苜蓿（M.truncatrula）基因组数据库进行序列比对分析，获得其最为同源的基因，然后根据同源基因设计引物进行序列扩增（引物见表1）。