《表1 实时荧光定量PCR扩增引物》

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《黄瓜种子胎萌生理特性及相关基因表达分析》

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从NCBI数据库下载玉米胎萌基因Vp1、Vp5和Vp10序列，并进行同源搜索，最终获得黄瓜同源基因Cs Vp1(LOC101214226）、Cs Vp5(LOC101210522）和Cs Vp10(LOC101214811），利用Primer 5.0设计实时荧光定量PCR扩增引物，如表1所示。取开花授粉后30、35、40、45和50 d的种子，利用RNA提取试剂盒提取其总RNA。经多功能酶标仪检测RNA浓度后，使用反转录试剂盒反转录合成c DNA，以其为模板，采用实时荧光定量PCR检测Cs Vp1、Cs Vp5和Cs Vp10基因的表达情况，以黄瓜Actin为内参基因（AB010922.1）。反应体系10.0μL:2×Cham Q Universal SYBR q PCR Master Mix 5.0μL，10μmol/L上、下游引物各0.2μL，c DNA模板0.4μL，用dd H2O补足至10.0μL。每个基因重复3次。扩增程序：95℃预变性30 s；95℃5 s，60℃30 s，进行45个循环。采用2-ΔΔCt方法计算各目的基因的相对表达量。