《表2 实时荧光定量PCR检测用引物序列及扩增产物长度》

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《苏姜猪SIRT3基因多态性及其组织表达定位分析》

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根据Gen Bank中猪SIRT3（登录号：NM＿001110057.1）基因序列和β-actin（登录号：KU672525.1）作为内参基因，采用Primer Premier 6.0和Beacon designer 7.8软件设计实时荧光定量PCR引物（表2），由上海英骏生物技术有限公司合成。根据说明书，使用TRIzol（Ta Ka Ra）提取所有受试猪各组织样品中的总RNA。取1 000 ng总RNA，以20μL反应体系反转录成c DNA。实时荧光定量PCR反应体系20μL:Power SYBR?Green Master Mix 10.0μL、Forward Primer(10μmol/L） 0.5μL、Reverse Primer （10μmol/L）0.5μL、c DNA 1.0μL。反应条件为：95℃1 min；40个循环（95℃15 s，63℃25 s），每个样品重复3次。利用2-ΔΔCT法计算各基因的相对表达量。