《表1 Cc Lhca-J9克隆及实时荧光定量PCR表达引物》

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《小飞蓬捕光叶绿素结合蛋白基因CcLhca-J9克隆及表达分析》

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从NCBI中选择保守性高的Lhca基因同源序列设计简并引物Cc J9-1（表1），进行PCR扩增获取目的基因片段。PCR反应程序：94℃预变性5 min；94℃变性30 s，55℃退火30 s，70℃延伸30 s，循环30次；70℃延伸7 min。凝胶电泳检测PCR产物，切胶回收纯化目的片段，连接到p Cambia2301载体，连接转化大肠杆菌DH5α（购于南京诺唯赞生物科技有限公司），挑取阳性克隆送上海生工生物工程有限公司测序[17]。根据已知目的片段设计5′和3′RACE特异引物（表1），采用Ta Ka Ra公司Clonetech SMARTer RACE5′/3′Kit扩增试剂盒说明扩增。获得Lhca的5′RACE序列、核心序列及3′RACE序列，根据三者拼接后序列设计引物（表1）确定Cc Lhca-J9全长。