《表1 MMP-2、MMP-3和MMP-9实时荧光定量PCR引物信息》

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《基质金属蛋白酶基因在兔关节软骨细胞体外损伤后不同时间点的表达变化》

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分别收集正常组和损伤组（1、3、7 d）各6或8孔细胞样本，使用RNA isolaterTM Total RNA Extraction Reagent（Biosharp公司）试剂提取细胞总RNA，按说明书操作，分光光度计测细胞总RNA的OD值和浓度，计算总RNA的体积，根据核酸测定方法。测量方法:加入DEPC水处理比色杯，待晾干后按照1μL RNA溶液加49μL DEPC水的比例加入。OD值为1.8~2.0，<1.8说明RNA降解，>2.0说明RNA有杂质不纯，有污染。总RNA电泳，配置1%的琼脂糖凝胶，0.25 g琼脂糖，25 m L 1×TBE，7μL EB，分别加样本5μL与2μL 6×RNA上样缓冲液混匀，电泳30 min凝胶成像仪下拍照保存。若只有一条带可能是RNA污染，2条带说明RNA质量好，3条带说明RNA降解。按照First Strand c DNA Synthesis Kit试剂盒说明书，将每个样本的总RNA逆转录成第一链c DNA。使用Primer 5.0软件设计基因MMP-2、MMP-3和MMP-9实时荧光定量PCR引物（见表1）。