《表1 实时荧光定量PCR引物信息》

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《人工光照对初情期前母兔生殖系统发育的影响》

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MTNR1A：褪黑素受体1A基因；PR：孕激素受体基因；ERA：雌激素受体α基因；ERB：雌激素受体β基因；EP1～4：前列腺素E2受体EP1～4基因；GAPDH:3-磷酸甘油醛脱氢酶基因；下同

参照Trizol（Invitrogen，美国）的操作说明书，提取各样品总RNA，使用1.5%琼脂糖凝胶电泳和Nanodrop核酸蛋白仪（ThermoFisher，美国）分析RNA提取质量和浓度。采用PrimeScriptTMRT-PCR Kit试剂盒（TaKaRa，大连），将RNA反转录合成cD-NA，具体操作参照试剂盒说明书。采用qRT-PCR技术检测目的基因表达量，所用引物信息见表1，引物均送至成都擎科新业生物技术有限公司合成，经成都擎科新业生物技术有限公司采用Sanger测序验证所有引物扩增子均为目的基因片段。参照购自大连TaKaRa公司的SYBR Premix Ex TaqTMⅡ试剂盒说明书配制PCR反应体系（共计10μL），其中SYBRⅡ5μL，上、下游引物（10 pmol/μL）各0.4μL，cDNA1μL，RNase Free H2O 3.2μL。qRT-PCR反应程序为95℃30 s；95℃5 s，各对引物在相应退火温度条件下30 s，合计39个循环。每个实验样品重复3次，将3-磷酸甘油醛脱氢酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）基因（GenBank No.NM＿001082253.1）作为内参基因，利用2-ΔΔCt法计算目的基因相对表达量（Livak，Schmittgen，2001）。