《表1 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)引物信息》

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《高粱SPL基因家族的鉴定及表达分析》


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取0.5 g叶片样品抽提RNA,本实验使用EA‐SYspin植物RNA快速提取试剂盒(Aidlab,Beijing,China,RN09)提取高粱叶片总RNA。RNA含量使用Nanodrop2000超微量分光光度计进行测定。每个样品取2μg RNA,首先用不含RNase的DNase‐I处理以除去基因组DNA,然后使用重组M‐MLV逆转录酶(Takara,Da‐lian,China)来反转录获得相应cDNA。采用ChamQ SYBR Color qPCR Master Mix(Vazyme,Nan‐jing,China)来进行实时荧光定量PCR(qRT‐PCR)分析,实时荧光定量PCR在CFX96 Thermo‐cycler(BIO‐RAD,USA)上进行,反应在含有5μL稀释的cDNA,200 nM基因特异性引物和10μL hamQ SYBR Color qPCR Master Mix的20μL体积中进行。反应条件如下:95℃5 min,95℃15 s,55℃30 s,共40个循环。实验以高粱肌动蛋白基因(Actin)作为内参,每个样品进行3次重复。用于SbSPL基因的qRT‐PCR分析的引物对见表1。