《表3 实时荧光定量PCR引物信息》

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《CRISPR/Cas13系统敲减HEK293T细胞ku70和lig4基因表达》

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当HEK293T细胞汇合度达到70%–90%时，参考Thermo Fisher Scientific公司的Lipofectamine3000 Reagent说明书转染细胞。以24孔板为例，每孔将500 ng Cas13a、b质粒分别和500 ng相应的U6-gRNA共转染至细胞中。转染48 h后，抽提细胞RNA，经反转录后对细胞cDNA进行实时荧光定量PCR，检测ku70和lig4的RNA表达水平，荧光定量PCR引物见表3。