《表1 实时荧光定量PCR引物信息》

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《福清山羊与努比亚黑山羊发情期卵巢组织RNA-Seq分析》

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为了进一步验证高通量测序结果以及发现新转录本序列的准确性，以18S rRNA为内参基因，随机挑选6个DEGs和2个新转录本，采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）验证基因表达量。内参基因引物参考文献设计[21]，其余基因和新转录本引物根据测序序列信息由ABI公司的Primer Express Software v2.0设计，铂尚生物技术（上海）有限公司合成，基因名称及引物信息见表1。以1.2中各样品RNA池为模板，采用TAKARA PrimeScript?RT reagent Kit with g DNA Eraser（TaKaRa，大连宝生物）试剂盒逆转录后进行qRT-PCR扩增，扩增体系20μL:c DNA模板1μL，上、下游引物各1μL，2×SYBR?Select Master Mix 10μL，ddH2O7μL。q RT-PCR扩增程序:95℃预变性2 min；95℃变性10s，60℃退火10s，72℃延伸40s，50个循环；最后72℃延伸5min；4℃保存。采用2-ΔΔCt法计算基因的相对表达量。