《表1 Pp PIN基因家族表达分析实时荧光定量PCR引物》

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《桃PIN蛋白基因家族鉴定及其在不同树型桃中的表达分析》


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Pp PIN:桃生长素外向转运体PIN蛋白;RPL13:核糖体蛋白L13。下同

从桃基因组数据库中下载Pp PIN蛋白基因家族的CDS序列,利用Primer Premier 5.0进行引物设计(表1),引物由生工生物工程股份有限公司合成(上海)。两种树型桃('大久保'和'洒红龙柱')不同部位组织材料总RNA提取采用Total RNA Rapid Ex‐traction Kit (生工生物工程股份有限公司,上海);q RT-PCR使用的模板c DNA合成用Prime Script RT Reagent Kit (Perfect Real Time)试剂盒(Ta Ka Ra,上海);应用Bio-Rad i Cycleri Q实时定量PCR仪(ABI,美国)进行扩增,以桃RPL13 (Prupe.2G323200)为内参基因,反应体系为20μL:c DNA 1μL、上下游引物(10μmol/L)各1μL、SYBR Premix EX Taq 10μL和dd H2O 7μL。反应程序为:50℃2 min;95℃2min,95℃3 s,60℃30 s,40个循环,实验重复3次。不同样品经q RT-PCR后获得相应的Ct值,经内参基因均一化处理后,采用2-ΔΔCt法计算基因的相对表达量。