《表1 葡萄APX基因家族的实时荧光定量引物》

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《葡萄APX基因家族的鉴定与表达分析》

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RNA提取采用植物提取试剂盒RNAplantRTR2303（中科瑞泰生物技术有限公司，北京）并按操作说明书进行。引物设计及后期引物合成均由上海生工生物工程技术服务有限公司完成（表1）。cDNA合成采用Prime Script RT reagent Kit(Perfect Real Time）试剂盒（TaKaRa）并参照说明书进行，定量PCR仪为Light Cycler?96 Real-Time PCR System(Roche）。用上述设计好的引物进行PCR扩增反应，其中18s-rRNA作为内参基因[30]，扩增总体系为20μL，包括上下游引物各1μL，cDNA 1.5μL，ddH2O 6.5μL，TB Green-II 10μL。反应程序为：95℃变性30 s；95℃变性10 s；60℃退火30 s；72℃延伸30 s；共40个循环，试验进行3次生物学重复。