《表1 VvSAP家族表达分析的实时荧光定量引物》

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《葡萄SAP家族的鉴定与表达分析》


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根据基因序列设计实时荧光定量PCR特异引物(表1),以葡萄Actin(XM_002265440)作为内参基因,采用OMEGA试剂公司的植物RNA提取试剂盒提取经过处理后的葡萄叶片RNA,利用TaK a Ra公司的反转录试剂盒PrimeScriptTM 1st Strand cD NA Synthesis Kit反转录合成cD NA第一条链,将cD NA稀释到相同浓度后用作实时荧光定量PCR的模板。qRT-PCR的反应体系为20μL,包括1μL cDNA模板,上、下游引物分别0.8μL,SYBR Green荧光染料为10μL,ddH 2O 7.4μL。反应程序为:95℃变性1 min,95℃变性10 s,58℃退火20 s,72℃延伸20 s,40个循环。每个处理设置3个重复,基因相对表达量采用2-ΔΔCt法进行分析。