《表1 用于实时荧光定量PCR分析的引物序列》

《表1 用于实时荧光定量PCR分析的引物序列》   提示:宽带有限、当前游客访问压缩模式
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《氯化汞对大鲵心脏和胰腺CYP2亚家族成员CYP2K1、CYP2F3、CYP2F5和CYP2C19基因表达的影响》


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采用实时定量PCR技术检测大鲵不同组织P450基因的相对表达量.根据1.2.2方法提取不同组织RNA并反转录成cDNA后进行实时定量PCR(以TBP基因为内参基因).用于荧光定量PCR的引物序列见表1.反应体系为20μL:GoTaq?qPCR Master Mix 10μL、cDNA模板1μL、Nuclease-free Water 7μL和上下游引物各1μL.反应在CFX96TM Real-Time System实时定量PCR仪(Bio-Rad)中进行,反应条件为:95℃预变性10 min;95℃变性30 s,60℃退火30 s,72℃延伸30 s,共40个循环;最后在60-95℃进行熔解曲线分析.选择表达相对稳定的TATA框结合蛋白基因(TATA-box-binding protein,TBP)作为内参基因,利用2-ΔΔCT方法计算CYP2亚家族基因的相对表达量[16].