《表1 用于实时荧光定量PCR的引物序列》

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《葛根素通过抑制线粒体凋亡通路和调节HSP72表达缓解热应激诱导的LLC-PK1细胞凋亡》

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使用实时荧光定量PCR进行mRNA的定量测定。使用EASYspin Plus组织/细胞RNA试剂盒（Aidlab Biotechnologies，北京）从LLC-PK1细胞中提取总RNA。按照cDNA逆转录试剂盒（Thermo Fisher，美国）的说明将总RNA逆转录成cDNA用于实时PCR。将cDNA（90μg/mL，1μL）、上、下游引物（5μmol/L，0.2μL）（表1）、5μL LighCycler?480SYBR GreenⅠMaster（Roche，瑞士）和3.6μL dd H2O加入反应体系。随后置于PCR仪扩增，扩增条件：95℃预变性10 min；95℃变性10 s，60℃退火20 s，72℃延伸30 s，共循环45次。45个循环后，在65和97℃下分析熔解曲线。使用β-actin基因作为内参，比较Ct法定量分析基因表达。