《表1 实时荧光定量PCR的引物序列》

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《KLF9基因腺病毒载体的构建及其脂肪酸氧化功能》

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用经典的灌流-胶原酶消化法获得小鼠肝脏原代细胞，铺至6孔板中，用1640(10%的血清，100 U/mL青霉素和0.1 mg/mL链霉素）培养，感染病毒前换新鲜的培养基。每个孔加120 pfu的病毒。采用含10%FBS的DMEM培养基培养293A细胞，培养基中添加100 U/mL青霉素和0.1 mg/mL链霉素，细胞在37℃、5%CO2的孵箱中培养，实验时取对数生长期细胞。感染病毒前换新鲜的培养基。每个孔加120 pfu的病毒，Trizol法提取293A细胞和肝脏原代细胞总RNA，超微量分光光度计定量，取2μg总RNA，加入Random primer用Thermofisher逆转录酶逆转录成cDNA。以100 ng c DNA为模板，在罗氏LightCycler 96仪器上进行扩增反应，条件为：95℃10 min、95℃30 s、55℃30 s、72℃30 s（捕捉荧光值），循环55次，并作熔解曲线。各基因的Q-PCR引物序列见表1。样本结果以目的基因与36B4的比值做相对定量分析，数据分析采用比较CT法，重复样本（n=3）取平均值。