《表1 实时荧光定量PCR引物序列》

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《白藜芦醇通过沉默调节蛋白1-解偶联蛋白2信号通路降低小鼠睾丸间质细胞TM3的氧化损伤》

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F和R分别代表上游和下游引物。F and R represent forward and reverse primers，respectively.

待RES（5.0μmol/L）处理氧化损伤细胞结束后，采用Trizol法提取细胞的总RNA，并用Nano Drop2000测定总RNA的浓度和纯度。总RNA产物经Hi ScriptⅡQ RT Super Mix for q PCR（+g DNA wiper）试剂盒反转录后，得到c DNA作为模板用于q PCR。在ABI Step One荧光定量PCR仪上，使用Cham QTM SYBRq PCR Master Mix试剂盒进行RT-q PCR。反应体系:2 Cham QTM SYBRq PCR Master Mix 10μL、上游引物0.4μL（10μmol/L）、下游引物0.4μL（10μmol/L）、50 ROX 0.4μL、c DNA2.0μL、双蒸水（dd H2O）6.8μL，总体积为20μL。反应条件:95℃预变性30 s；95℃变性10 s，60℃退火延伸30 s，40个循环。熔解曲线反应条件:95℃，变性15 s，60℃退火60 s，95℃变性15 s。以β-肌动蛋白（β-actin）作为内参，采用2-△△Ct法计算目的基因的mRNA相对表达量，对照组基因的mRNA相对表达量设定为1。所用引物由华大基因股份有限公司设计合成，引物序列见表1。