《表1 实时荧光定量PCR引物序列》

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《白叶1号白化过程中叶绿体蛋白质组差异分析》

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采用Tri-Reagent法提取鲜叶总RNA[14]。参照天根生化QuantScript RT Kit逆转录试剂盒操作手册，逆转录成c DNA作为荧光定量PCR模板。利用Primer 3 Plus（http://www.primer3p lus.com/cgi-bin/dev/primer3plus.cgi）设计引物（表1），由上海生物工程股份有限公司合成。GAPDH为内参基因[6]。反应体系为2×SuperReal PreMix Plus 10μL；10μmol·L-1上下游引物各0.6μL，cDNA模板1μL，加水至终体系20μL。采用3步法反应程序:95℃预变性15 min；95℃变性10 s，退火温度58～60℃，退火时间15～25 s，72℃延伸20 s，共45个循环。采用2-（35）（35） CT方法计算基因的相对表达量。