《表1 实时荧光定量PCR引物序列》

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《尼古丁抑制小鼠睾丸间质细胞睾酮生成中的线粒体损伤作用》

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染毒处理结束后，收集细胞，按照 基因组DNA纯化试剂盒说明书，提取细胞DNA，检测DNA浓度后，稀释DNA样本至终浓度为20 ng/μl。以线粒体DNA编码的COX I基因为目的基因，核基因编码的单拷贝基因GAPDH为内参基因，线粒体DNA拷贝数（mitochondrial DNA copy number，mt DNAcn）表示为COX I基因与GAPDH基因表达的相对比值。COX I和GAPDH引物由上海生工生物工程技术服务有限公司合成，引物序列见表1。采用SYBRR Premix ExTaqTMII试剂盒进行PCR反应，每组各3个平行样本。PCR反应体积为25μl，反应条件为:预变性（95℃、10 min），变性（94℃、30 s）、退火（60℃、30s）、延伸（95℃、40 s），循环40次。反应结束后通过溶解曲线分析确定产物的特异性。采用2-ΔΔCt对PCR结果进行相对定量分析。