《表1 实时荧光定量PCR引物序列》

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《抗纤抑癌方对肝癌前病变大鼠整合素α5β1/FAK信号通路的影响》

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采用Trizol试剂提取总RNA，核酸紫外分光光度计测定经稀释的RNA提取物的OD值和浓度，判断RNA纯度，计算RNA浓度。采用二步法进行mRNA表达的检测。反转录按试剂盒说明书操作，取5μL总RNA，在反转录酶M-MLV和引物oligo（dT）15条件下进行反转录，得到cDNA链。以cDNA为模板进行实时荧光定量PCR反应，反应体系为20μL，含2μL cDNA，10pmol/μL上下游引物各0.5μL，SYBRmix 10μL，不足的体积以无RNA酶的水补齐。以GAPDH作为内参照。循环参数:预变性94℃×10min，变性94℃×15s，退火60℃×60s，延伸72℃×10min，共45个循环。所得Ct值按照2-ΔΔCt法均一化处理后进行统计。引物序列见表1。