《表1 Cm WRKYs的q RT-PCR引物》

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《甜瓜WRKY基因家族鉴定及其响应低温胁迫的表达分析》

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采用Trizol试剂（TIANGEN，北京）提取甜瓜叶片总RNA。采用反转录试剂盒（Ta Ka Ra，大连）合成c DNA。根据Cm WRKYs基因进化分析结果，选取各亚组中部分同源WRKY基因进行低温胁迫诱导表达分析。利用Primer Primer 5.0设计Cm WRKYs及内参基因（β-actin，Gene Bank No.AY859055）的特异性引物（表1）。引物由上海生工生物股份有限公司合成。PCR反应体系：10μL SYBR Green Master mix （2×），10μmol/L上下游引物各0.8μL，c DNA模板2μL，dd H2O 6.4μL。PCR反应程序：95℃预变性30 s；95℃5 s，60℃30 s，50个循环。以0 h对照组的表达量为总对照，计算对照组和处理组在3和24 h的基因相对表达量，计算方法采用2-??Ct方法（Livak，Schmittgen，2001），计算结果以log2（相对表达量+1）公式转换。利用R-3.6.0软件中的pheatmap包对26个基因的q RT-PCR结果进行热图绘制；对于其中11个上调表达程度较高的基因，利用R-3.6.0软件中的方差齐性检验（Levene test）、方差分析（aov函数）以及均值多重比较（Tur‐key's honestly significant difference (HSD）和Fish‐er's least significant difference （LSD）)进行差异显著性分析和标记，最后用ggplot2包进行柱状图展示。