《表1 用于q RT-PCR的引物》

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《禹白附提取物抑制人胃癌细胞增殖转移的实验研究》

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按5×105个/孔的密度将对数生长期的GC9811细胞均匀铺在6孔板中，设对照组和实验组，对照组加入为0 g/L的禹白附提取物的培养基100μL，实验组分别加入终浓度为15、30 g/L的禹白附提取物的培养基100μL，每组设置3个复孔。作用48 h后，用RNAiso TM plus提取RNA，再参照反转录试剂盒PrimeScript TM RT reagent Kit with gDNA Eraser将提取的总RNA反转录成cDNA，采用qRT-PCR检测MMP-9、MMP-2、E-Cadherin的表达情况，以B2M和GAPDH作为内参。用Beacon Designer 8软件设计特异性的荧光引物（表1）。qRT-PCR反应体系：20μL反应体系中含0.5μmol/L上/下游引物、10μL GoTaq ? q PCR Master Mix、0.5μL cD NA、ddH2O 20μL。qRT-PCR反应程序：第一步，95℃预变性5 min，1个循环。第二步95℃变性10 s，59℃退火10 s，72℃延伸15 s，45个循环。qRT-PCR仪自动生成熔解曲线。用无模板和无转录反应模板作阴性对照。每个样品进行3次重复，2-△△Ct的方法[5]进行相对定量分析。