《表1 全长ORF克隆引物,荧光定量PCR表达分析引物》

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《向日葵PMADS2 LIKE基因的克隆及表达分析》

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根据向日葵花发育转录组数据库中的基因序列经Blast（https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi）序列比对以后获得目的基因（GenBank登录号:XM＿0221-63899.1）设计特异性引物PMADS2 LIKE-F/R（表1），以反转录cDNA为模板扩增该基因完整ORF框序列。PCR扩曾体系为：5×Buffer 10μL，ddH2O 30μL，dNTPs 4μL，cDNA模板3μL，PMADS2 LIKE-F/R引物各1μL，FastPfu Fly DNA聚合酶1μL，在容量200μL的PCR管中吹打混匀。98℃5 min，98℃30 s，56℃30 s，72℃1.5 min，34次循环，72℃延伸5 min。PCR扩增产物经过1%琼脂糖凝胶电泳，紫外检测出与扩增基因的大小一致的目的条带后，切胶回收，连接pEASY誖-Blunt vector克隆载体，并转入大肠杆菌（E.coli DH5α感受态细胞）。挑菌，菌落PCR筛选阳性转化子，送往擎科生物有限公司（成都）测序。