《表1 砂糖橘防御相关基因克隆和实时荧光定量PCR引物》

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《黄龙病菌(Candidatus Liberibacter asiaticus)感染诱导砂糖橘(Citrus reticu-late)防御基因表达》

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实时荧光定量PCR（qRT-PCR）以SYBER Green为染料，梯度稀释质粒DNA为模版制备标准曲线。检测时以10倍稀释的样品cDNA为模板，以18S rRNA为内参，各基因荧光定量PCR引物（表1），反应体为20μL，包括10μL SYBER Green mix，浓度为10μmol/L的上下游引物各0.5μL，2.5μLcDNA，剩余体积用ddH2O补足。每个反应重复3次。qRT-PCR使用Bio-Rad公司iQ5定量PCR仪，反应程序为95℃2 min；95℃10 s，60℃30 s，72℃30 s，共39个循环；反应结束后分析融解曲线。样品所有目的基因和内参基因的Ct以3次重复的平均值计算，结果分析依照2-ΔΔCt法（Livak and Schmittgen，2001）进行，数据均以mRNA的相对表达量表示，统计学分析运用单因素方差分析和Duncan检验。