《表1 长白猪CIDEC基因CDS、启动子克隆和荧光定量PCR引物》

  提示：宽带有限、当前游客访问压缩模式

本系列图表出处文件名：随高清版一同展现

《长白猪CIDEC基因、启动子的克隆及其在不同组织中的表达研究》

1. 获取 高清版本忘记账户？点击这里登录

1. 下载图表忘记账户？点击这里登录

从Ensembl数据库筛选猪CIDEC启动子序列，选取基因5'端上游约2 000 bp和第一个外显子下游200 bp作为预测的转录调控序列并用Primer 5.0设计引物（表1）。采用降落PCR扩增长白猪CIDEC启动子，在冰上建立10μL PCR体系：10×Pfu DNA pol Buffer 1μL，模板（100 ng/μL)1μL，Pfu DNA聚合酶0.3μL，上下游引物（10 pmol/L）各0.25μL，dNTP（各2.5 mM/L)1μL，ddH2O 6.2μL。降落PCR程序设置为95℃5 min；95℃45 s；65/50℃45 s，72℃3 min，95℃45 s，15个循环；50/55℃45 s，72℃3 min，72℃5 min，30个循环；4℃保存。扩增产物用1%的琼脂糖凝胶电泳检测，用D2500 Gel Extraction Kit(Omega）对PCR扩增产物进行纯化。纯化DNA产物与pGL-3 Basic载体连接，建立10μL连接体系：回收目的片段6μL，300 ng/μL pGL-3 Basic载体2μL，T4 DNA Ligase Buffer 1μL，T4 DNA Ligase1μL，16℃连接过夜，将连接产物转化进入DH5α，挑取单克隆菌落并进行测序。