《表1 启动子克隆和缺失片段扩增PCR引物》

  提示：宽带有限、当前游客访问压缩模式

本系列图表出处文件名：随高清版一同展现

《甘蔗ScMOC1基因启动子的克隆与瞬时表达分析》

1. 获取 高清版本忘记账户？点击这里登录

1. 下载图表忘记账户？点击这里登录

使用基因组步移试剂盒GenomeWalkerTM Universal Kit克隆ScMOC1基因的启动子序列，所有试验步骤按照试剂盒说明书进行。首先使用Dra I/Eco RV/Pvu II/Stu I 4种限制性内切酶酶切并纯化ROC22基因组DNA，再将酶切并纯化的DNA分别与试剂盒里面的步移接头Genomewalker Adapter连接，制备好4种不同的基因组步移模板。然后根据课题组前期克隆的ScMOC1基因序列（KP876558）的5′端设计步移引物pMOC1-R1和内巢引物p MOC1-R2（表1），分别与试剂盒提供的接头引物AP1和AP2进行两轮PCR扩增，PCR使用Advatntage 2 PCR Enzyme System，扩增条件为94℃25 s，72℃3 min，5个循环；94℃25 s，67℃3 min，20个循环；67℃，7 min。PCR产物经琼脂糖凝胶电泳检测并使用全式金的EasyPure Quick Gel Extraction Kit回收纯化后与T-载体连接转化大肠杆菌DH5α感受态细胞，挑取阳性克隆并测序分析。