《表1 Bp ZFP4启动子5'缺失片段与GUS基因融合所用引物序列》

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《白桦BpZFP4基因启动子克隆和逆境响应元件功能分析》

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注:标注部分为线性化载体两末端的同源序列；为用于载体线性化的酶切位点。

根据ClonExpressⅡOne Step Cloning Kit（Vazyme）使用说明设计PCR引物，其中在正反向引物中分别引入XbaⅠ和BglⅡ酶切位点以及线性化载体两末端的同源序列（表1）。以携带Bp ZFP4全长启动子的T载体质粒为模板进行PCR扩增。PCR反应体系如下:10×Ex PCR Buffer 2.0μL，2.5 mmol·L-1d NTPs 2.0μL，10 mmol·L-1上下游引物各0.5μL，100 ng DNA，2 U·μL-1Ex Taq DNA Polymerase 0.1μL，ddH2O补足20μL。PCR反应程序:94℃预变性3 min，94℃变性30 s，58℃退火30 s，72℃延伸2 min，35个循环，72℃延伸10 min。将不同片段PCR产物胶回收，酶切验证并与去除CaMV35S启动子的p CAMBIA1301载体片段进行重组反应。