《表1 Bp UGDH启动子缺失片段的引物》

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《杂交构树UDP-葡萄糖脱氢酶基因编码蛋白的亚细胞定位及其启动子5′端缺失片段的功能分析》

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注：下划线处为p ORE R1载体多克隆位点两侧序列

根据Bp UGDH基因启动子5'端逐一形成的5个缺失片段序列设计5条包含p ORE R1载体多克隆位点两侧序列的重组引物和反向引物Bp UG-DH-Xbal-R（如表1所示），以质粒p MD19-T-Pro.Bp UGDH为模板，并利用Trans Start?Fast Pfu DNA Polymerase kit（Trans Gen Biotech）分别扩增Pro.Bp UGDH 5'端逐一形成的5个缺失片段序列。PCR反应体系含有10μL 5×Trans Start?Fast Pfu Buffer，4μL 2.5 mmol·L-1d NTP，2.5 U TransStart?Fast Pfu DNA Polymerase，1μL的10μmol·L-1的重组引物PB2-ETH(-973）-F2、PB3-Me JA（-465）-F3、PB4-低温（-355)-F4、PB5-IAA（-281）-F5、PB6-GA（-244）-F6和Bp UGDH-Xbal-R以及2μL质粒p MD19-T-Pro.Bp UGDH。PCR扩增条件为：95℃3min；95℃20 s，68℃20 s，72℃1 min，35个循环；72℃10 min作为最终延伸。1%的琼脂糖电泳检测、回收目的条带。