《表2 APOA2基因启动子缺失片段扩增引物序列》

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《猪APOA2启动子与转录因子GATA1作用的研究》

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注：小写字母为保护碱基；下划线为酶切位点（上游：Mlu I，下游：Xho I)

提取NCBI数据库中猪APOA2基因的序列信息（Gene ID:100153243），针对其5′端上游序列设计7条上游引物（APOA2-F1～APOA2-F6）和1条下游引物（APOA2-R）（表2）。以猪基因组DNA为模板，PCR扩增获得7条逐级缩短的启动子片段。PCR产物经凝胶电泳回收、纯化，获得目的片段并连接至p MD-18T载体；提取质粒与p GL3-Basic载体质粒一同经Mlu I和Xho I 37℃双酶切消化2 h；再次经凝胶电泳回收、纯化后用T4DNA连接酶于16℃过夜；转化于大肠杆菌DH5α中、挑菌；测序成功后扩大培养，进行去内毒素质粒抽提；测定质粒浓度并双酶切鉴定成功后于-20℃保存备用。此外，通过对APOA2基因各缺失片段荧光活性的分析，推测-813～-565区域内可能存在一个或多个正向调控元件。因此，对上述区域再次进行缺失，引物为2-APOA2-F1～2-APOA2-F5（表2），下游引物不变。