《表1 扩增人c GAS启动子片段引物》

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《人cGAS基因启动子的克隆鉴定及功能初探》

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下划线部分为酶切位点，上游为限制性内切酶KpnⅠ位点，下游为BglⅡ限制性内切酶位点。

双酶切通过限制性内切酶KpnⅠ和BglⅡ实现，用T4 DNA连接酶对回收产物和pGL3-basic质粒的酶切片段进行连接。连接产物转化大肠杆菌DH5α。加入800μL LB培养基，200 r/min摇45 min后，将100μL菌液接种至含氨苄青霉素的LB平板上。第2天收板，挑取单克隆至LB液体培养基，16～20 h后抽提质粒。以构建成功的质粒作为模板，通过步移缺失法克隆不同长度的人cGAS启动子片段，引物序列见表1，用同样的方法构建不同缺失片段的人cGAS启动子荧光素酶报告质粒。