《表1 扩增人FAT1启动子区片段引物序列》

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《人FAT1基因启动子的克隆鉴定及其功能浅析》

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酶切位点用下划线标出，上游酶切位点为限制性内切酶KpnⅠ，下游酶切位点为限制性内切酶XhoⅠ。

用限制性内切酶KpnⅠ、XhoⅠ双酶切PCR产物和pGL3-basic质粒，双酶切后的片段经回收纯化后用T4连接酶连接，转入大肠杆菌E.coli DH5α，37℃摇床摇菌，1 h后涂布在含氨苄青霉素的LB固体培养基上，置于37℃培养箱培养过夜，次日挑取单克隆进行菌落PCR验证，取阳性单克隆菌落送测序，测序结果正确者扩大培养并37℃摇床过夜，次日提取质粒。对质粒进行双酶切，进行1%琼脂糖凝胶验证。通过测序和双酶切鉴定正确者，命名为pFAT1-1。以pFAT1-1 DNA为模板，通过步移缺失构建不同长度的FAT1启动子序列（引物见表1），通过PCR扩增获得相应产物。用同样的方法构建不同缺失片段的人FAT1启动子荧光素酶报告基因重组质粒，分别命名为pFAT1-2、pFAT1-3、pFAT1-4、pFAT1-5。