《表1 PCR扩增耐药基因引物序列和片段长度》

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《孕晚期妇女B族链球菌携带情况及耐药机制研究》

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取GBS单菌落于3ml脑心浸液肉汤培养基，35℃、120rpm摇菌培养，按照试剂盒说明书，提取GBS菌株全基因组。PCR检测GBS菌株的耐药基因ermA、ermB、ermC、ermTR、mefA/E和lnuB基因，引物序列和片段长度，见表1[8-9]。PCR体系总体积20μl，灭菌双蒸水7μl，Tap mix 10μl，上游下游引物各1μl，模板DNA1μl。扩增条件：95°C预变性5min，95°C变性30s，43～49°C退火30s，72°C延伸1min，共35个循环，72°C 10min。扩增产物经1.2%琼脂糖凝胶电泳验证，出现相应条带即为阳性。PCR产物送上海桑尼生物科技有限公司进行测序，将ermB、ermTR、mefA/E和lnuB基因测序结果与NCBI中已有的耐药基因序列（NG＿047798.1、AF＿002716.1、NG＿047963.1、NG＿047921.1等）进行BLAST比对。