《表3 目的基因引物序列和预扩增片段长度》

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《菌陈提取物对肉鸡脂肪肝出血综合征发生率及PPAR-γ、NF-κB mRNA表达的影响》

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以合成的cDNA为模板，qRT-PCR分别扩增β-actin、PPARγ和NF-κB基因。根据GenBank中发表的基因序列，用Primer Premier 6.0软件设计引物，引物由华大基因合成，序列及片段长度见表3。PCR反应体系为：2×SYBR qPCR Mix 10μL，50×Dye Rox 0.4μL，cDNA Template 0.5μL，primer F（10μmol/L）0.4μL，primer R（10μmol/L）0.4μL，ddH2O补足至20μL。PCR反应条件为：94℃3 min，94℃15 s、60℃30 s、72℃30 s，循环45次；延伸72℃8 min。每个样品设5个重复，目的基因和β-actin的反转录产物PCR扩增体系相同，反应在实时定量PCR仪（T300型，美国ABI公司）上进行，PPARγ和NF-κB mRNA的表达以其与内参β-actin的相对表达量来计算。