《表1 候选内参基因的引物序列、扩增片段长度及扩增效率》

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《岩牡蛎正常和低盐胁迫下定量PCR内参基因的筛选与验证》

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选择延伸因子（EF1A）、甘油-3-磷酸脱氢酶基因（GAPDH）、核异质核糖核蛋白（RO21）、α微管蛋白（TUA）和β微管蛋白（TUB）5个候选的内参基因，引物通过primer 5.0（http://www.premierbiosoft com/）对岩牡蛎的转录组数据（Genbank accession:GGUV00000000）进行设计，通过琼脂糖凝胶电泳和熔解曲线分析检测引物特异性（表1）。使用Roche480进行定量分析。10μL体系为:1μL模板cDNA，0.3μL正反引物（10μmol/L），5μL 2×SYBR EVE PCR Mix（abm），3.4μL超纯水。扩增反应程序为:95℃预变性5 min；95℃变性5 s，60℃（不同引物退火温度不同）退火30 s，72℃延伸30 s，40个循环，每个样品重复3次。引物扩增效率E通过对5倍梯度稀释的cDNA进行q-PCR所得Ct值绘制标准曲线，根据公式E=（10-1/slope-1）×100%得到。