《表1 候选内参基因引物序列和扩增效率》

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《葡萄不同摘心处理下qRT-PCR内参基因的筛选与验证》

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所有葡萄样品提取的总RNA经10 g/L的琼脂糖凝胶电泳检测，28S和18S条带清晰，尾部无明显降解，其OD260/OD280的值介于1.8～2.0，说明所提取的样品总RNA质量较好，可满足本试验的后续研究。利用设计的15个内参基因的引物，以混合cDNA为模板，分别进行qRT-PCR反应，验证所设计引物的特异性，反应产物经20 g/L琼脂糖凝胶电泳检测，15个内参基因PCR扩增产物均获得单一条带，且条带符合设计的预期大小，介于70～250 bp（图1），说明所设计的内参基因引物特异性好，可用于后续内参基因稳定性的分析。利用特异性验证后的引物，以2倍稀释的7个浓度梯度的混合cDNA模板，分别对15个候选内参基因进行RT-qPCR扩增，并通过LightCycler?480 Software Version 1.5(Roche）软件直接获得标准曲线（相关系数均达到0.99以上）和扩增效率，15个内参基因扩增效率在1.955～2.039（表1）。同时，15个内参基因扩增片段的溶解曲线均为单峰，且重复性好。