《表1 候选内参基因引物序列和扩增子》

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《不同光质条件下刺葡萄红色愈伤组织的RT-qPCR内参基因筛选》

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部分候选基因的引物来源于前人相关的研究，另外一些候选基因的引物来源与刺葡萄细胞培养物转录组的de novo序列.这些引物序列通过在线软件Primer-BLAST（https://www.ncbi.nlm.nih.gov/tools/primer-blast/）分析设计，由福州尚亚生物技术有限公司合成引物.采用TB GreenTM Premix Ex TaqTM II(Tli RNaseH Plus）（TaKaRa公司）试剂，基于罗氏Light Cycler?480II平台进行RT-qPCR扩增反应来验证引物的特异性.反应体系为20μL体系：TB GreenTM Premix Ex TaqTM II(Tli RNaseH Plus）（TaKaRa）10μL、上下游引物（10μmol/L）分别0.8μL、模板cDNA 2μL、无菌水6.4μL.PCR反应程序为：95℃预变性30 s；95℃变性5 s，60℃退火30 s，40个循环；融解曲线，95℃变性5 s，60℃退火1 min，梯度加热（每秒0.11℃），直至95℃，1个循环；最后快速降温（每秒2.2℃）至50℃，30 s，1个循环.每个RT-qPCR反应设3次重复，并以不添加模板的空白管为对照.通过单峰的溶解曲线来验证.利用1.5%的琼脂糖凝胶电泳来验证扩增子的单一条带.最终选取10个候选基因，进行下一步的试验，这10个基因包括Actin、AP-2、EF1-α、GAPDH、VAG、SAND、α-Tubulin、NAD5、60SRP、UBQ10.所用的引物序列及其相关的参数见表1.