《表1 候选内参基因引物序列及其相关信息》

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《地榆醇提物对对虾致病菌VP_(AHPND)生长影响及最适内参基因的筛选》

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以金属浴加热法提取正常培养条件下VPAHPND的DNA为模板进行普通PCR扩增，6种内参基因引物信息见表1。普通PCR程序为：95℃10 min；95℃5 s，55℃34 s，72℃45 s，40个循环。用1%琼脂糖凝胶电泳检法检测条带完整性，并通过TaKaRa MiniBEST Agarose Gel DNA Extraction Kit Ver.4.0（大连宝生物公司）对目的条带进行切胶回收，使用pMD18-T Vector Cloning Kit（大连宝生物公司）对目的基因进行克隆。将克隆好的菌液送至生工生物工程（上海）股份有限公司进行测序，验证目的片段是否成功导入质粒。用Ta Ka Ra MiniBEST Plasmid Purification Kit Ver.4.0（大连宝生物公司）提取克隆成功菌液的质粒，并以此标准品为模板，进行qRT-PCR分析，检测引物效率。qRT-PCR程序为：95℃10 min；95℃5 s，55℃34 s，72℃45 s，40个循环；熔解曲线分析使用Eppendorf的默认程序：95℃15 s，60℃15 s，95℃15 s。