《表1 耐药与毒力基因检测PCR引物序列和目的产物长度》

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《化脓性链球菌耐药与毒力基因研究》

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8种耐药基因和3种毒力基因检测均为PCR法。检测项目见表1。引物序列由无锡新吴区新克隆数据分析工作室提供，PCR试剂盒由无锡市克隆遗传技术研究所提供，实验步骤完全按说明书进行操作。每种PCR检测的反应系统均为重组的耐热DNA聚合酶（r Taq DNA pol，日本Takara公司产品）1个单位（体积0.2μL），与重组的耐热DNA聚合酶配匹的10倍浓度缓冲液2μL；上游引物2μL（1.0μmol/L），下游引物2μL（1.0μmol/L）；dATP、dCTP、dTTP和dGTP混合液2μL（浓度均2mmol/L）；超纯水7μL，菌株DNA提取液4.8μL，合计总体积20μL。热循环为:95℃预变性2min，然后95℃30s→55℃30s→72℃60s，重复30周期，最后一轮72℃延长至5min。PCR扩增产物经2%琼脂糖凝胶电泳30min，紫外线下凝胶上出现与阳性对照分子量相同的目的条带即判别为阳性。