《表1 碳青霉烯酶基因检测PCR引物序列及产物长度》

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《改良Hodge试验、CNPt及mCIM筛选肺炎克雷伯菌产碳青霉烯酶的价值》

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PCR引物参考相关文献[4-5]设计，序列见表1。扩增碳青霉烯酶基因包括blaKPC、blaNDM-1、blaIMP、blaVIM、blaSIM和blaOXA-48。阳性对照和阴性对照为前期经测序证实携带或不携带碳青霉烯酶基因的临床菌株。煮沸法提取DNA模板，PCR反应体系为20μL，包括2×Taq PCR Master Mix 10μL，上下游引物各1μL，DNA模板2μL，ddH2O6μL。PCR扩增反应条件:预变性95℃，5 min，变性95℃，30 s，退火（具体温度详见表1）30 s，延伸72℃，30 s，共35个循环；最后72℃延伸10 min。扩增产物经1%凝胶电泳（100 V、40 mA）后凝胶成像系统观察结果拍照。阳性扩增产物送华大基因科技股份有限公司测序，序列经BLAST数据库进行对比分析。